Людмила Александровна Волкова, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
142132
Московская обл.
Подольск
Дубровицы, 60
Ludmila A. Volkova, Candidate of Biological Sciences, Senior Researcher
Moscow region
Podolsk
60, Dubrovitsy
Наталья Александровна Волкова, доктор биологических наук, главный научный сотрудник, руководитель лаборатории
142132
Московская обл.
Подольск
Дубровицы, 60
Natalia A. Volkova, Doctor of Biological Sciences, Chief Researcher, Head of the Laboratory
142132
Moscow region
Podolsk
60, Dubrovitsy
Актуальность. Создание криобанков биологического материала является одним из ключевых методов сохранения и поддержания биоразнообразия генетических ресурсов животных. Широко используемым для сохранения в условиях криобанков биоматериалом являются зрелые половые клетки самцов – сперматозоиды. В качестве перспективной альтернативы рассматривается использование для данных целей стволовых клеток семенников – сперматогоний, что делает возможным отбор биоматериала от неполовозрелых животных с ценным генотипом. В статье представлены данные по получению культуры сперматогоний самцов межвидовых гибридов домашних овец с архаром. Методы. Объектом исследований являлись сперматогенные клетки межвидовых гибридов овец романовской породы и архара. Материалом для получения культуры сперматогенных клеток служили семенники гибридных самцов. Были оптимизированы условия выделения и поддержания в культуре in vitro сперматогоний с использованием гистологических, цитологических и культуральных методов. Результаты. Установлено, что на результативность получения культуры сперматогенных клеток, максимально обогащенной сперматогониями, влияет возраст самцов, от которых отбирают биоматериал, предварительная очистка сперматогоний от других типов сперматогенных и соматических клеток семенника, ростовая среда и тип фидерного слоя, используемые для культивирования сперматогоний. Показано, что оптимальным возрастом самцов для отбора биоматериала является возрастной период от рождения до 4 месяцев. В этот период клетки эпителиосперматогенного слоя семенных канальцев семенников гибридных самцов представлены в основном одним типов сперматогенных клеток – сперматогониями (92–100 %). Установлено, что максимальная очистка сперматогоний от других типов клеток достигается посредством их разделения по адгезии. Высокая интенсивность роста и формирования колоний сперматогоний наблюдается при их культивировании на фидерном слое, сформированном первичной культурой собственных клеток Сертоли, а также клетками Сертоли барана. В данных условиях прикрепление сперматогоний к клеткам фидерного слоя отмечается на 1–2-й день культивирования, формирование колоний – на 6-й день культивирования.
Relevance. The creation of biological material cryobanks is one of the key methods for the conservation and maintenance of the biodiversity of animal genetic resources. The biomaterial widely used for preservation in cryobank conditions are mature germ cells of males – spermatozoa. As a promising alternative for these purposes is considered the use of testis stem cells – spermatogonia which makes it possible to select biomaterial from immature animals with a valuable genotype. The article presents data on obtaining a culture of spermatogonia of males of interspecific hybrids of domestic sheep with argali. Methods. The object of research was spermatogenic cells of sheep's interspecific hybrids from the Romanov breed with argali. The testes of hybrid males served as a material for obtaining a spermatogenic cells culture. The conditions for isolating and maintaining spermatogonia in culture in vitro were optimized using histological, cytological, immunohistochemical and cultural methods. Results. It has been established that the effectiveness of obtaining a spermatogenic cells culture, maximally enriched with spermatogonia, are affected by the age of the males from which the biomaterial is taken, the preliminary purification of spermatogonia from other types of spermatogenic and somatic testicular cells, the growth medium and the type of feeder layer used for the cultivation of spermatogonia. It is shown that the optimal age of males for the selection of biomaterial is the age period from birth to 4 months. During this period, the cells of the epitheliospermatogenic layer in the seminiferous tubules of the testes from hybrid males are mainly represented by one type of spermatogenic cells – spermatogonia (92–100 %). The maximum purification of spermatogonia from other types of cells is achieved by separating them according to adhesion. High intensity of growth and formation of spermatogonia colonies is observed when they are cultivated on the feeder layer formed by the primary culture of own Sertoli cells, as well as Sertoli cells from another rams. Under these conditions, the attachment of spermatogonia to the cells of the feeder layer is noted on the 1st – 2nd day of cultivation, the formation of colonies – on the 6th day of cultivation.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.