Айнур Ильнурович Яруллин - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник,
Научный городок — 2, Казань, 420075
Ainur Ilnurovich Yarullin - Candidate of Biological Sciences, Leading Reseacher,
Nauchny gorodok — 2, Kazan, 420075
Ришат Салаватович Мухаммадиев - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник,
Научный городок — 2, Казань, 420075
Rishat Salavatovich Mukhammadiev - Candidate of Biological Sciences, Senior Researcher,
Nauchny gorodok — 2, Kazan, 420075
Ринат Салаватович Мухаммадиев - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник,
Научный городок — 2, Казань, 420075
Rinat Salavatovich Mukhammadiev - Candidate of Biological Sciences, Senior Researcher,
Nauchny gorodok — 2, Kazan, 420075
Ильсияр Габделгазизовна Каримуллина - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник,
Научный городок — 2, Казань, 420075
Ilsiyar Gabdelgazizovna Karimullina - Candidate of Biological Sciences, Senior Researcher ,
Nauchny gorodok — 2, Kazan, 420075
Диана Анатольевна Сорокина - младший научный сотрудник,
Научный городок — 2, Казань, 420075
Diana Anatolyevna Sorokina - Junior Researcher,
Nauchny gorodok — 2, Kazan, 420075
Вали Галиевич Гумеров - доктор ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник,
Научный городок — 2, Казань, 420075
Vali Galievich Gumerov - Doctor of Veterinary Sciences, Leading Researcher,
Nauchny gorodok — 2, Kazan, 420075
Актуальность. Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота остается одной из основных проблем современного молочного и мясного скотоводства. Эффективность оздоровительных мероприятий в интенсивном животноводстве зависит от своевременного выявления инфицированного скота, что в свою очередь обусловлено серологической активностью и специфичностью используемых в диагностических наборах антигенов.
Цель исследования — разработка способа очистки антигена аденовируса первой подгруппы аденовирусной инфекции крупного рогатого скота (КРС).
Методы. Серологическую активность компонентов возбудителя аденовирусной инфекции крупного рогатого скота исследовали с помощью метода иммуноблотинга и иммуноферментного анализа. Получение антигена аденовируса КРС включало приготовление матровой расплодки аденовируса КРС на перевиваемой клеточной линии ВНK-21/13, наработку вирусной биомассы методом роллерного культивирования, разрушение инфицированных клеток ультразвуком и освобождение от клеточных фрагментов с помощью центрифугирования, осаждение антигена с применением ПЭГ-6000, концентрирование вируса через ступенчатый градиент хлористого цезия путем ультрацентрифугирования.
Результаты. В результате разделения вирусного материала в ступенчатом градиенте плотности хлористого цезия получены три антигенные фракции. Наиболее очищенной являлась фракция № 1, которая содержала мажорный участок с молекулярным весом 50,0 кДа и проявила максимальную антигенную активность. Титр антител, выявленный на 45-е сутки после иммунизации указанной фракцией, составил в сыворотке крови кроликов 1:3200. Полученные результаты открывают перспективы применения очищенного авторами антигена аденовируса первой подгруппы при конструировании тест-системы для проведения скрининговых исследований на аденовирусную инфекцию КРС и мониторинга эффективности противоэпизоотических мероприятий.
Relevance. Adenoviral infection of cattle remains one of the main problems of modern dairy and beef cattle breeding. The effectiveness of health measures in intensive livestock farming depends on the timely detection of infected livestock, which in turn is determined by the serological activity and specificity of the antigens used in diagnostic kits.
The aim of the study was to develop a method for purification of adenovirus antigen of the first subgroup of adenovirus infection in cattle (cattle).
Methods. The serological activity of the components of the causative agent of adenovirus infection in cattle was studied using the immunoblotting method and enzyme immunoassay. Obtaining the bovine adenovirus antigen included the preparation of a bovine adenovirus mat brood on ВНK-21/13, the production of viral biomass by roller cultivation, the destruction of infected cells by ultrasound and the release of cellular fragments by centrifugation, precipitation of the antigen using PEG-6000, and concentration of the virus through a step gradient of cesium chloride by ultracentrifugation.
Results. As a result of separation of the viral material in a stepwise density gradient of cesium chloride, three antigenic fractions were obtained. The most purified was fraction № 1, which contained a major region with a molecular weight of 50.0 kDa and showed maximum antigenic activity. The antibody titer detected in the blood serum of rabbits on the 45th day after their immunization with this fraction was 1:3200. The results obtained open up prospects for the use of the adenovirus antigen of the first subgroup purified by the authors in the design of a test system for screening studies for adenovirus infection in cattle and monitoring the effectiveness of antiepizootic measures.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.