vetpressАграрная наукаAgrarian science0869-81552686-701XРедакция журнала "Аграрная наука"10.32634/0869-8155-2025-400-11-15-21vetpress-3888Research ArticleВЕТЕРИНАРИЯVETERINARY MEDICINEВыделение и очистка рекомбинантного гексона бычьего аденовируса 3-го типаIsolation and purification of recombinant bovine adenovirus type 3 hexonehttps://orcid.org/0009-0006-0211-3334АхуноваА. Р.AkhunovaA. R.

Алсу Рузалевна Ахунова - младший научный сотрудник

Научный городок — 2, Казань, 420075

Alsu Ruzalevna Akhunova - Junior Researcher

Nauchny gorodok — 2, Kazan, 42007

aahunova@inbox.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2650-6459ГалееваА. Г.GaleevaA. G.

Антонина Глебовна Галеева - кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник

Научный городок — 2, Казань, 420075

ул. им. К. Маркса, 65, Казань, 420015

Antonina Glebovna Galeeva - Candidate of Veterinary Sciences, Leading Researcher

Nauchny gorodok — 2, Kazan, 42007

65 K. Marx Str., Kazan, 420015

antonina-95@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1717-0498ЯруллинА. И.YarullinA. I.

Айнур Ильнурович Яруллин - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник

Научный городок — 2, Казань, 420075

Ainur Ilnurovich Yarullin - Candidate of Biological Sciences, Leading Reseacher

Nauchny gorodok — 2, Kazan, 42007

abii@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8786-1310ЕфимоваМ. А.EfimovaM. A.

Марина Анатольевна Ефимова -  доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник

Научный городок — 2, Казань, 420075

ул. им. К. Маркса, 65, Казань, 420015

Marina Anatolyevna Efimova - Doctor in Biological Sciences, Leading Researcher

Nauchny gorodok — 2, Kazan, 42007

65 K. Marx Str., Kazan, 420015

marina-2004r@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7217-4083МингалеевД. Н.MingaleevD. N.

Данил Наильевич Мингалеев - доктор ветеринарных наук, доцент, директор; доктор ветеринарных наук, доцент

Научный городок — 2, Казань, 420075

ул. им. К. Маркса, 65, Казань, 420015

Danil Nailevich Mingaleev - Doctor of Veterinary Sciences, Associate Professor, Director; Doctor of Veterinary Sciences, Associate Рrofessor

Nauchny gorodok — 2, Kazan, 42007

65 K. Marx Str., Kazan, 420015

damin80@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7210-7470РавиловР. Х.RavilovR. Kh.

Рустам Хаметович Равилов - доктор ветеринарных наук, член-корреспондент Академии наук Республики Татарстан, профессор кафедры 

ул. им. К. Маркса, 65, Казань, 420015

Rustam Khamеtovich Ravilov - Doctor of Veterinary Sciences, Corresponding Member of the Academy of Sciences of the Republic of Tatarstan, Professor of the Department of Epizootology and Parasitology

65 K. Marx Str., Kazan, 420015

rustam.ravilov@mail.ruФедеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасностиРоссияFederal Center for Toxicological, Radiation and Biological SafetyRussian FederationФедеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности; Казанский государственный аграрный университетРоссияFederal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety; Kazan State Agrarian UniversityRussian FederationКазанский государственный аграрный университетРоссияKazan State Agrarian UniversityRussian Federation20251911202501115–21Copyright © Ахунова А.Р., Галеева А.Г., Яруллин А.И., Ефимова М.А., Мингалеев Д.Н., Равилов Р.Х., 20252025Ахунова А.Р., Галеева А.Г., Яруллин А.И., Ефимова М.А., Мингалеев Д.Н., Равилов Р.Х.Akhunova A.R., Galeeva A.G., Yarullin A.I., Efimova M.A., Mingaleev D.N., Ravilov R.K.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.vetpress.ru/jour/article/view/3888Актуальность

Актуальность. Аденовирусы (Mastadenovirus, Adenoviridae) являются одним из превалирующих этиологических агентов комплекса респираторно-кишечных заболеваний КРС, занимая до 70% в нозологической структуре заболеваемости молодняка. Диагностика аденовирусной инфекции затруднена в связи с разнообразием серотипов. Наиболее широкое распространение в практике получил иммуноферментный анализ. Повысить чувствительность и специфичность метода возможно путем комплектации тест-систем очищенными рекомбинантными антигенами.

Методы

Методы. В работе применяли методы биоинформационного анализа и генной инженерии. Клонирование синтезированной вставки, кодирующей фрагмент гена гексона, осуществляли в вектор pET-22b(+), экспрессию проводили в организме E. coli. Для подбора условий очистки применяли классические методы дезинтеграции клеток в сочетании с металлхелатной аффинной хроматографией.

Результаты

Результаты. С помощью классических методов биоинформационного анализа нуклеотидной последовательности штамма WBR-1 бычьего аденовируса 3-го типа была разработана эпитопная структура усеченного рекомбинантного гексона молекулярной массой 17,0 кДа, белок с гексагистидиновым тегом был синтезирован в прокариотической системе экспрессии штаммом-продуцентом E. coli BL21(DE3)pLysS/pET-22b(+)-Hexon в виде телец включения. Были подобраны оптимальные условия культивирования штамма и проведения металлхелатной хроматографической очистки на Ni-NTA сефарозе в денатурирующих условиях, что позволило получить электрофоретически гомогенный продукт. Были оптимизированы условия постановки непрямого иммуноферментного анализа на основе рекомбинантного гексона. Описанный в работе методический подход может быть применен для получения рекомбинантного гексона в качестве антигена для получения поликлональных или моноклональных антител против аденовируса 3-го типа, что более эффективно и экономично по сравнению с антигеном нативного вируса, культивируемого в клетках млекопитающих

Relevance

Relevance. Adenoviruses (Mastadenovirus, Adenoviridae) are among the prevailing etiologic agents of the complex of respiratory and intestinal diseases of cattle, accounting for up to 70% of the nosological structure of morbidity in young animals. Diagnosis of adenovirus infection is difficult due to the diversity of serotypes, the most widely used in practice is enzyme immunoassay. It is possible to increase the sensitivity and specificity of the method by equipping test systems with purified recombinant antigens.

Methods

Methods. The work used methods of bioinformatics analysis and genetic engineering. Cloning of the synthesized insert encoding a fragment of the hexon gene was carried out in the pET-22b(+) vector, expression was carried out in E. coli organism. Classical methods of cell disintegration in combination with metal-chelate affinity chromatography were used to select purification conditions.

Results

Results. Using classical methods of bioinformatics analysis of the nucleotide sequence of the WBR-1 strain of bovine adenovirus type 3, the epitope structure of the truncated recombinant hexon with a molecular weight of 17.0 kDa was developed. The protein with a hexahistidine tag was synthesized in a prokaryotic expression system by the producer strain E. coli BL21(DE3)pLysS/pET-22b(+)-Hexon in the form of inclusion bodies. Optimal conditions for culturing the strain and performing metal-chelate chromatographic purification on Ni-NTA Sepharose under denaturing conditions were selected, which made it possible to obtain an electrophoretically homogeneous product. Conditions for setting up an indirect enzyme immunoassay based on recombinant hexon were optimized. The methodological approach described in the work can be applied to obtain recombinant hexon as an antigen for obtaining polyclonal or monoclonal antibodies against adenovirus type 3, which is more effective and economical compared to the antigen of the native virus cultured in mammalian cells. 

аденовирус крупного рогатого скотагексонрекомбинантный белокметаллхелатная хроматографияиммуноферментный анализbovine adenovirushexonrecombinant proteinmetal chelate chromatographyenzyme-linked immunosorbent assayReferencesJesse S.T. et al. Molecular characterization of a bovine adenovirus type 7 (Bovine Atadenovirus F) strain isolated from a systemically infected calf in Germany. Virology Journal. 2022; 19: 89. https://doi.org/10.1186/s12985-022-01817-yJesse S.T. et al. Molecular characterization of a bovine adenovirus type 7 (Bovine Atadenovirus F) strain isolated from a systemically infected calf in Germany. Virology Journal. 2022; 19: 89. https://doi.org/10.1186/s12985-022-01817-yVidovszky M.Z., Szeredi L., Doszpoly A., Harrach B, Hornyák Á. Isolation and complete genome sequence analysis of a novel ovine adenovirus type representing a possible new mastadenovirus species. Archives of Virology. 2019; 164(8): 2205‒2207. https://doi.org/10.1007/s00705-019-04299-6Vidovszky M.Z., Szeredi L., Doszpoly A., Harrach B, Hornyák Á. Isolation and complete genome sequence analysis of a novel ovine adenovirus type representing a possible new mastadenovirus species. Archives of Virology. 2019; 164(8): 2205‒2207. https://doi.org/10.1007/s00705-019-04299-6Каримуллина И.Г. и др. Серологический мониторинг респираторных и желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота в молочных комплексах Приволжского федерального округа. Ветеринария Кубани. 2025; (2): 13‒15. https://www.elibrary.ru/cgebyaKarimullina I.G. et al. Serological monitoring of respiratory and gastrointestinal diseases of the large horned cattle in dairy complexes of the Volga Federal District. Veterinaria Kubani. 2025; (2): 13‒15 (in Russian). https://www.elibrary.ru/cgebyaЯруллин А.И. и др. Оценка серопревалентности аденовирус ной инфекции крупного рогатого скота в некоторых животноводческих хозяйствах. Инновационные решения актуальных вопросов биологической и токсикологической безопасности. Матери алы Всероссийской научно-практической конференции с между народным участием. Казань. 2023; 214‒216. https://elibrary.ru/knzcneYarullin A.I. et al. Assessment of the seroprevalence of adenovirus infection in cattle in some livestock farms. Innovative solutions to topical issues of biological and toxicological safety. Proceedings of the All-Russian scientific and practical conference with international participation. Kazan. 2023; 214‒216 (in Russian). https://elibrary.ru/knzcneShemelkova G.O., Yuzhakov A.G., Zaberezhny A.D., Shemelkov E.V., Aliper T.I. Development of a test system for detecting bovine adenovirus DNA based on polymerase chain reaction. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science. 2019; 315(4): 042027. https://doi.org/10.1088/1755-1315/315/4/042027Shemelkova G.O., Yuzhakov A.G., Zaberezhny A.D., Shemelkov E.V., Aliper T.I. Development of a test system for detecting bovine adenovirus DNA based on polymerase chain reaction. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science. 2019; 315(4): 042027. https://doi.org/10.1088/1755-1315/315/4/042027Гаффаров Х.З., Яруллин А.И., Гумеров В.Г., Каримуллина И.Г., Усольцев К.В. Аденовирусы крупного рогатого скота (обзор). Ветеринария. 2019; (11): 3‒8. https://doi.org/10.30896/0042-4846.2019.22.11.03-08Gaffarov Kh.Z., Yarullin A.I., Gumerov V.G., Karimullina I.G., Usoltsev K.V. Biological properties of adenoviruses and their role in respiratory-intestinal pathology of cattle (review). Veterinary medicine. 2019; (11): 3‒8 (in Russian). https://doi.org/10.30896/0042-4846.2019.22.11.03-08Shen Y., Liu J., Zhang Y., Ma X., Yue H., Tang C. Prevalence and characteristics of a novel bovine adenovirus type 3 with a natural deletion fiber gene. Infection, Genetics and Evolution. 2020; 83: 104348. https://doi.org/10.1016/j.meegid.2020.104348Shen Y., Liu J., Zhang Y., Ma X., Yue H., Tang C. Prevalence and characteristics of a novel bovine adenovirus type 3 with a natural deletion fiber gene. Infection, Genetics and Evolution. 2020; 83: 104348. https://doi.org/10.1016/j.meegid.2020.104348Li Q., He S., Zou Y., Yue H., Tang C., Liu J. Pathogenicity of a novel bovine adenovirus type 3 with a natural deletion partial fiber gene in BALB/c mice. Frontiers in Veterinary Science. 2023; 10: 1138159. https://doi.org/10.3389/fvets.2023.1138159Li Q., He S., Zou Y., Yue H., Tang C., Liu J. Pathogenicity of a novel bovine adenovirus type 3 with a natural deletion partial fiber gene in BALB/c mice. Frontiers in Veterinary Science. 2023; 10: 1138159. https://doi.org/10.3389/fvets.2023.1138159Mukantayev K.N., Tursunov K.A., Kanayev D.B., Tokhtarova L., Ramankulov Ye.M., Mukanov K.K. Obtaining strain-producer of recombinant hexon of bovine adenovirus type 3. Eurasian Journal of Applied Biotechnology. 2019; (1): 73‒84. https://elibrary.ru/wznmfhMukantayev K.N., Tursunov K.A., Kanayev D.B., Tokhtarova L., Ramankulov Ye.M., Mukanov K.K. Obtaining strain-producer of recombinant hexon of bovine adenovirus type 3. Eurasian Journal of Applied Biotechnology. 2019; (1): 73‒84. https://elibrary.ru/wznmfhVaatstra B.L., Tisdall D.J., Blackwood M., Fairley R.A. Clinicopathological features of 11 suspected outbreaks of bovine adenovirus infection and development of a real-time quantitative PCR to detect bovine adenovirus type 10. New Zealand Veterinary Journal. 2016; 64(5): 308‒313. https://doi.org/10.1080/00480169.2016.1198280Vaatstra B.L., Tisdall D.J., Blackwood M., Fairley R.A. Clinicopathological features of 11 suspected outbreaks of bovine adenovirus infection and development of a real-time quantitative PCR to detect bovine adenovirus type 10. New Zealand Veterinary Journal. 2016; 64(5): 308‒313. https://doi.org/10.1080/00480169.2016.1198280Werid G.M. et al. Bovine adenovirus prevalence and its role in bovine respiratory disease complex: A systematic review and meta analysis. The Veterinary Journal. 2025; 310: 106303. https://doi.org/10.1016/j.tvjl.2025.106303Werid G.M. et al. Bovine adenovirus prevalence and its role in bovine respiratory disease complex: A systematic review and meta analysis. The Veterinary Journal. 2025; 310: 106303. https://doi.org/10.1016/j.tvjl.2025.106303Lehmkuhl H.D., Smith M.H., Dierks R.E. A bovine adenovirus type 3: Isolation, characterization, and experimental infection in calves. Archives of Virology. 1975; 48(1): 39‒46. https://doi.org/10.1007/BF01320564Lehmkuhl H.D., Smith M.H., Dierks R.E. A bovine adenovirus type 3: Isolation, characterization, and experimental infection in calves. Archives of Virology. 1975; 48(1): 39‒46. https://doi.org/10.1007/BF01320564Gundegmaa U., Raadan O., Wu H.-C., Wang H.-Y., Wu M.-C., Chu C.-Y. Recombinant hexon protein as a new bovine adenovirus type 3 subunit vaccine candidate. Journal of Veterinary Research. 2023; 67(1): 23‒31. https://doi.org/10.2478/jvetres-2023-0014Gundegmaa U., Raadan O., Wu H.-C., Wang H.-Y., Wu M.-C., Chu C.-Y. Recombinant hexon protein as a new bovine adenovirus type 3 subunit vaccine candidate. Journal of Veterinary Research. 2023; 67(1): 23‒31. https://doi.org/10.2478/jvetres-2023-0014Toogood C.I.A., Crompton J., Hay R.T. Antipeptide antisera define neutralizing epitopes on the adenovirus hexon. Journal of General Virology. 1992; 73(6): 1429‒1435. https://doi.org/10.1099/0022-1317-73-6-1429Toogood C.I.A., Crompton J., Hay R.T. Antipeptide antisera define neutralizing epitopes on the adenovirus hexon. Journal of General Virology. 1992; 73(6): 1429‒1435. https://doi.org/10.1099/0022-1317-73-6-1429Chiocca S., Kurzbauer R., Schaffner G. et al. The complete DNA sequence and genomic or organization of the ovian adenovirus CELO. J. Virol. 1996; 79: 2939–2949. https://elibrary.ru/vjtshrChiocca S., Kurzbauer R., Schaffner G. et al. The complete DNA sequence and genomic or organization of the ovian adenovirus CELO. J. Virol. 1996; 79: 2939–2949. https://elibrary.ru/vjtshrRossmanith W., Horvath E. Bovine adenoviruses. VI. An enzyme linked immunosorbent assay for detection of antibodies to bovine adenovirus types belonging to subgroups I and II. Microbiologica. 1988; 11(4): 387‒394.Rossmanith W., Horvath E. Bovine adenoviruses. VI. An enzyme linked immunosorbent assay for detection of antibodies to bovine adenovirus types belonging to subgroups I and II. Microbiologica. 1988; 11(4): 387‒394.Kulkarni D.D. et al. Development and Evaluation of Recombinant Nucleocapsid Protein Based Diagnostic ELISA for Detection of Nipah Virus Infection in Pigs. Journal of Immunoassay and Immunochemistry. 2016; 37(2): 154‒166. https://doi.org/10.1080/15321819.2015.1074922Kulkarni D.D. et al. Development and Evaluation of Recombinant Nucleocapsid Protein Based Diagnostic ELISA for Detection of Nipah Virus Infection in Pigs. Journal of Immunoassay and Immunochemistry. 2016; 37(2): 154‒166. https://doi.org/10.1080/15321819.2015.1074922Spencer K.-A., Osorio F.A., Hiscox J.A. Recombinant viral proteins for use in diagnostic ELISAs to detect virus infection. Vaccine. 2007; 25(30): 5653‒5659. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2007.02.053Spencer K.-A., Osorio F.A., Hiscox J.A. Recombinant viral proteins for use in diagnostic ELISAs to detect virus infection. Vaccine. 2007; 25(30): 5653‒5659. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2007.02.053Дятлова В.И. Применение методов обратной вакцинологии для разработки новых вакцин против бруцеллеза. Бактериология. 2021; 6(4): 16‒29. https://elibrary.ru/vswoqsDyatlova V.I. Application of reverse vaccinology methods for the development of new vaccines against brucellosis. Bacteriology. 2021; 6(4): 16‒29 (in Russian). https://elibrary.ru/vswoqsМима К.А., Каторкина Е.И., Каторкин С.А., Цыбанов С.Ж., Малоголовкин А.С. In silico идентификация B- и T-клеточных эпитопов белка CD2v вируса африканской чумы свиней (African swine fever virus, Asfivirus, Asfarviridae). Вопросы вирусологии. 2020; 65(2): 103‒112. https://doi.org/10.36233/0507-4088-2020-65-2-103-112Mima K.A., Katorkina E.I., Katorkin S.A., Tsybanov S.Zh., Malogolovkin A.S. In silico prediction of B- and T-cell epitopes in the CD2v protein of african swine fever virus (African swine fever virus, Asfivirus, Asfarviridae). Problems of Virology. 2020; 65(2): 103‒112 (in Russian). https://doi.org/10.36233/0507-4088-2020-65-2-103-112Ахунова А.Р., Насыров Ш.М., Алеева З.З., Арутюнян Г.С., Галеева А.Г., Ефимова М.А. Получение рекомбинантного гликопротеина Erns вируса классической чумы свиней для DIVA совместимых тест-систем. Ветеринария Кубани. 2024; (6): 21‒23. https://elibrary.ru/gjstybAkhunova A.R., Nasyrov Sh.M., Aleeva Z.Z., Arutyunyan G.S., Galeeva A.G., Efimova M.A. Classic swine fever virus Erns glycoprotein recombinant production for DIVA-compatible test systems. Veterinaria Kubani. 2024; (6): 21‒23 (in Russian). https://elibrary.ru/gjstybFroger A., Hall J.E. Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method. JoVE. 2007; (6): e253. https://doi.org/10.3791/253Froger A., Hall J.E. Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method. JoVE. 2007; (6): e253. https://doi.org/10.3791/253Грудинин М.П. и др. Клонирование и экспрессия в E. coli рекомбинантного белка VP1 вируса инфекционной анемии птиц. Российский ветеринарный журнал. 2019; (2): 12‒20. https://doi.org/10.32416/article_5cd16d06b14db8.99635578Grudinin M.P. et al. Generation and characterization of the VP1 recombinant protein of the chicken anemia virus. Russian Veterinary Journal. 2019; (2): 12‒20 (in Russian). https://doi.org/10.32416/article_5cd16d06b14db8.99635578Grabski A., Drott D., Handley M., Mehler M., Novy R. Extraction and Purification of Proteins from E. Coli without Harvesting Cells. The Scientific World Journal. 2002; 2(1): 36‒38. https://doi.org/10.1100/tsw.2002.19Grabski A., Drott D., Handley M., Mehler M., Novy R. Extraction and Purification of Proteins from E. Coli without Harvesting Cells. The Scientific World Journal. 2002; 2(1): 36‒38. https://doi.org/10.1100/tsw.2002.19Park A.-R., Jang S.-W., Kim J.-S., Park Y.-G., Koo B.-S., Lee H.-C. Efficient recovery of recombinant CRM197 expressed as inclusion bodies in E. coli. PLOS One. 2018; 13(7): e0201060. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0201060Park A.-R., Jang S.-W., Kim J.-S., Park Y.-G., Koo B.-S., Lee H.-C. Efficient recovery of recombinant CRM197 expressed as inclusion bodies in E. coli. PLOS One. 2018; 13(7): e0201060. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0201060Nekoufar S., Fazeli A., Reza Fazeli M. Solubilization of Human Interferon β-1b Inclusion Body Proteins by Organic Solvents. Advanced Pharmaceutical Bulletin. 2020; 10(2): 233‒238. https://doi.org/10.34172/apb.2020.027Nekoufar S., Fazeli A., Reza Fazeli M. Solubilization of Human Interferon β-1b Inclusion Body Proteins by Organic Solvents. Advanced Pharmaceutical Bulletin. 2020; 10(2): 233‒238. https://doi.org/10.34172/apb.2020.027Singh S.M., Panda A.K. Solubilization and refolding of bacterial inclusion body proteins. Journal of Bioscience and Bioengineering. 2005; 99(4): 303‒310. https://doi.org/10.1263/jbb.99.303Singh S.M., Panda A.K. Solubilization and refolding of bacterial inclusion body proteins. Journal of Bioscience and Bioengineering. 2005; 99(4): 303‒310. https://doi.org/10.1263/jbb.99.303Kielkopf C.L., Bauer W., Urbatsch I.L. Bradford Assay for Determining Protein Concentration. Cold Spring Harbor Protocols. 2020; 2020(4): 102269. https://doi.org/10.1101/pdb.prot102269Kielkopf C.L., Bauer W., Urbatsch I.L. Bradford Assay for Determining Protein Concentration. Cold Spring Harbor Protocols. 2020; 2020(4): 102269. https://doi.org/10.1101/pdb.prot102269Галеева А.Г. и др. Экспрессия в E. Coli маркированного рекомбинантного гликопротеина Е2 вируса классической чумы свиней. Международный вестник ветеринарии. 2024; (2): 49‒57. https://doi.org/10.52419/issn2072-2419.2024.2.49Galeeva A.G. et al. Expression of the labeled recombinant glycoprotein E2 of the classical swine fever virus in E. Coli. International Journal of Veterinary Medicine. 2024; (2): 49‒57 (in Russian). https://doi.org/10.52419/issn2072-2419.2024.2.49Николаева Ю.А. и др. Рекомбинантный нуклеопротеин вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для серологи ческой диагностики. Ветеринарный врач. 2025; (2): 85‒93. https://elibrary.ru/sclvypNikolaeva Yu.A. et al. Recombinant nucleoprotein of porcine reproductive and respiratory syndrome virus for serological diagnostics. The Veterinarian. 2025; (2): 85‒93 (in Russian). https://elibrary.ru/sclvypВолосникова Е.А. и др. Получение растворимого интерферона гамма человека в системе экспрессии Escherichia coli при снижении температуры культивирования. Прикладная биохимия и микробиология. 2023; 59(2): 167‒173. https://doi.org/10.31857/S0555109923020174Volosnikova E.A. et al. Production of Soluble Human Gamma Interferon in the Escherichia coli Expression System with a Decrease in Cultivation Temperature. Applied Biochemistry and Microbiology. 2023; 59(2): 167‒173 (in Russian). https://doi.org/10.31857/S0555109923020174

The authors declare that there are no conflicts of interest present.