Разработка способа получения антигена аденовируса первой подгруппы аденовирусной инфекции крупного рогатого скота

Актуальность. Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота остается одной из основных проблем современного молочного и мясного скотоводства. Эффективность оздоровительных мероприятий в интенсивном животноводстве зависит от своевременного выявления инфицированного скота, что в свою очередь обусловлено серологической активностью и специфичностью используемых в диагностических наборах антигенов.

Цель исследования — разработка способа очистки антигена аденовируса первой подгруппы аденовирусной инфекции крупного рогатого скота (КРС).

Методы. Серологическую активность компонентов возбудителя аденовирусной инфекции крупного рогатого скота исследовали с помощью метода иммуноблотинга и иммуноферментного анализа. Получение антигена аденовируса КРС включало приготовление матровой расплодки аденовируса КРС на перевиваемой клеточной линии ВНK-21/13, наработку вирусной биомассы методом роллерного культивирования, разрушение инфицированных клеток ультразвуком и освобождение от клеточных фрагментов с помощью центрифугирования, осаждение антигена с применением ПЭГ-6000, концентрирование вируса через ступенчатый градиент хлористого цезия путем ультрацентрифугирования.

Результаты. В результате разделения вирусного материала в ступенчатом градиенте плотности хлористого цезия получены три антигенные фракции. Наиболее очищенной являлась фракция № 1, которая содержала мажорный участок с молекулярным весом 50,0 кДа и проявила максимальную антигенную активность. Титр антител, выявленный на 45-е сутки после иммунизации указанной фракцией, составил в сыворотке крови кроликов 1:3200. Полученные результаты открывают перспективы применения очищенного авторами антигена аденовируса первой подгруппы при конструировании тест-системы для проведения скрининговых исследований на аденовирусную инфекцию КРС и мониторинга эффективности противоэпизоотических мероприятий.

1. Галеева А.Г. и др. Идентификация вариантов вируса вирусной диареи крупного рогатого скота — контаминантов производственных клеточных линий. Аграрная наука. 2025; (2): 61‒66. https://doi.org/10.32634/0869-8155-2025-391-02-61-66

2. Gaudino M., Nagamine B., Ducatez M.F., Meyer G. Understanding the mechanisms of viral and bacterial coinfections in bovine respiratory disease: a comprehensive literature review of experimental evidence. Veterinary Research. 2022; 53: 70. https://doi.org/10.1186/s13567-022-01086-1

3. Лобова Т.П., Михайлова В.В., Скворцова А.Н., Шишкина М.С. Верификация тест-системы для выявления антител к вирусу диареи крупного рогатого скота иммуноферментным методом «ВД КРС — СЕРОТЕСТ плюс». Аграрная наука. 2024; 379(2): 48–52. https://doi.org/10.32634/0869-8155-2024-379-2-48-52

4. Dyakonova A., Siben A. Dangerous bacterial infections of farm animals in Russia and the Tyumen region. International Scientific and Practical Conference “From Modernization to Rapid Development: Ensuring Competitiveness and Scientific Leadership of the AgroIndustrial Complex” (IDSISA 2024). BIO Web of Conferences. 2024; 108: 03010. https://doi.org/10.1051/bioconf/202410803010.

5. Makarova V.N., Badeeva O.B., Simanova I.N., Korukina M.V. Etiology and diagnosis of the gastrointestinal and respiratory diseases of calves in the farms of the Vologda region. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science. 2020; 548; 072027. https://doi.org/10.1088/1755-1315/548/7/072027

6. Батомункуев А.С., Гретченко Ю.А. Вирусные инфекционные болезни крупного рогатого скота в Иркутской области. Вестник ИрГСХА. 2020; 101: 112‒119. https://www.elibrary.ru/jlbqrm

7. de Jong A. et al. Antimicrobial susceptibility among respiratory tract pathogens isolated from diseased cattle and pigs from different parts of Europe. Journal of Applied Microbiology. 2023; 134(8): lxad132. https://doi.org/10.1093/jambio/lxad132

8. Panghal R., Dahiya S., Gupta A.K., Sharma V., Bangar Y., Kakker N.K. Persistence of maternal antibodies in calves born of combined foot-and-mouth disease + haemorrhagic septicaemia vaccinated buffaloes at organized dairy farm. Indian Journal of Animal Sciences. 2023; 93(8): 759–763. https://doi.org/10.56093/ijans.v93i8.127857

9. Лартон Р.Р., Алимов А.М. Экспресс-индикация возбудителей вирусной диареи, инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 крупного рогатого скота. Вестник Марийского государственного университета. Серия: Сельскохозяйственные науки. Экономические науки. 2022; 8(1): 35‒41. https://doi.org/10.30914/2411-9687-2022-8-1-35-41

10. Красочко П.А., Красочко И.А., Целуева Н.И., Дмитриев К.А. Изучение поствакцинальных антител у коров к вирусам, вызывающим респираторные инфекции. Актуальные проблемы лечения и профилактики болезней молодняка: материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию учреждения образования «Витебская ордена “Знак Почёта” государственная академия ветеринарной медицины». Витебск: Витебская государ ственная академия ветеринарной медицины. 2024; 183–188. https://www.elibrary.ru/wmwjhf

11. Гумеров В.Г. и др. Сероиммунологический мониторинг аденовирусной инфекции крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Приволжского федерального округа. Инновационные решения актуальных вопросов биобезопасности. Сборник материалов Международной научнопрактической конференции. Казань: Альянс. 2022; 173‒176. https://www.elibrary.ru/teqjaa

12. Paim W.P. et al. Identification and genetic characterization of an isolate of bovine adenovirus 7 from the United States, a putative member of a new species in the genus Atadenovirus. Archives of Virology. 2021; 166(10): 2835–2839. https://doi.org/10.1007/s00705-021-05184-x

13. Jesse S.T. et al. Molecular characterization of a bovine adenovirus type 7 (Bovine Atadenovirus F) strain isolated from a systemically infected calf in Germany. Virology Journal. 2022; 19: 89. https://doi.org/10.1186/s12985-022-01817-y

14. Vaatstra B.L., Tisdall D.J., Blackwood M., Fairley R.A. Clinicopathological features of 11 suspected outbreaks of bovine adenovirus infection and development of a real-time quantitative PCR to detect bovine adenovirus type 10. New Zealand Veterinary Journal. 2016; 64(5): 308‒313. https://doi.org/10.1080/00480169.2016.1198280

15. Яруллин А.И. и др. Оценка серопревалентности аденовирусной инфекции крупного рогатого скота в некоторых животноводческих хозяйствах. Инновационные решения актуальных вопросов биологической и токсикологической безопасности: сборник материалов Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. Казань. 2023; 214–216. https://www.elibrary.ru/knzcne

16. Спиридонов А.Г. Иммуноферментный метод диагностики анаэробной энтеротоксемии животных. Ветеринарный врач. 2018; (6): 26‒29. https://www.elibrary.ru/yqvejn

17. Горбунова М.Е., Усольцев К.В., Шангараев Р.И., Громова Е.А., Хаертынов К.С., Галеева А.Г. Очистка антигенов вируса лейкоза крупного рогатого скота методом ультрацентрифугирования. Ветеринарный врач. 2024; (2): 43‒48. https://www.elibrary.ru/wdipnk

18. Ефимова М.А. и др. Выделение, очистка и оценка серологической активности антигенов вируса бешенства. Проблемы особо опасных инфекций. 2017; (4): 27‒31. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2017-4-27-31

19. Ефимова М.А. и др. Выделение гликопротеина вируса бешенства методом трехфазной экстракции и характеристика его антигенных свойств. Проблемы особо опасных инфекций. 2022; (1): 86‒93. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2022-1-86-93

20. Savelieva E., Avdeenko A. The use of antigens derived from Bacillus thuringiensis bacteria for further differentiation. Heliyon. 2024; 10(8): e29744. https://doi.org/10.1016/j.heliyon.2024.e29744

21. Мухамеджанова А.Г., Ефимова М.А., Чернов А.Н., Хаертынов К.С., Ахмадеев Р.М. Получение антигена вируса бешенства и оценка его активности и специфичности. Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2018; 236: 138‒142. https://www.elibrary.ru/pjtypr

22. Земсков А.М., Земскова В.А., Бакулева Н.И. Современные инфекции. Принципы диагностики и лечения. Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2024; 2: 30–36. https://doi.org/10.14427/jipai.2024.2.30

23. Нестеренко Л.Н., Алаторцева Г.И., Амиантова И.И., Крымский М.А., Борисова В.Н. Обнаружение антигена вируса гепатита Е в образцах воды и молока с помощью иммунохроматографической тест-системы. Лабораторная диагностика. Восточная Европа. 2024; 13(S1): 192–194. https://www.elibrary.ru/yrwlmw

24. Ахмадеев Р.М. и др. Получение антигена вируса бешенства методом трехфазной экстракции. Ветеринарный врач. 2020; (5): 26‒33. https://www.elibrary.ru/cuhfmc

25. Глазкова Д.В., Михайлюк Е.А., Шипулин Г.А., Богословская Е.В. Очистка аденоассоциированного вируса DJ методом анионообменной хроматографии: оптимизация условий. Биотехнология. 2023; 39(4): 68‒80. https://doi.org/10.56304/S023427582304004X

26. Nasukawa T. et al. Virus purification by CsCl density gradient using general centrifugation. Archives of Virology. 2017; 162(11): 3523‒3528. https://doi.org/10.1007/s00705-017-3513-z

27. Зульфугарова С.Т., Рустамова С.М., Гусейнова И.М. Активность антиоксидантных ферментов и термостабильность мембран у генотипов твердой пшеницы при тепловом стрессе. Аграрная наука. 2022; (2): 56‒61. https://doi.org/10.32634/0869-8155-2022-356-2-56-61

28. Laemmli U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259): 680‒685. https://doi.org/10.1038/227680a0

29. Мухаммадиев Р.С. и др. Очистка антигенов штамма ТК-А (ВИЭВ)-В2 бычьего альфагерпесвируса биотипа 1. Ветеринария Кубани. 2025; (3): 1‒7. https://doi.org/10.33861/2071-8020-2025-3-3-7

30. Смелянский В.П. и др. Сравнительная оценка диагностических препаратов на основе антигенов коксиелл Бернета, выделенных разными методами. Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. 2009; 3(31): 21–23. https://www.elibrary.ru/plumfl

31. Каримуллина И.Г. и др. Подбор условий выращивания бычьего герпесвируса и бычьего вируса вирусной диареи на культурах клеток. Ветеринарный врач. 2025; (2): 68‒76. https://www.elibrary.ru/hltmvm

32. Woldemariam T., Wang W., Said A., Tikoo S.K. Regions of bovine adenovirus-3 IVa2 involved in nuclear/nucleolar localization and interaction with pV. Virology. 2020; 546: 25‒37. https://doi.org/10.1016/j.virol.2020.04.006

33. Zhao X., Tikoo S.K. Nuclear and Nucleolar Localization of Bovine Adenovirus-3 Protein V. Frontiers in Microbiology. 2020; 11: 579593. https://doi.org/10.3389/fmicb.2020.579593