Лабораторные испытания ОТ-ПЦР тест-системы VetMAX BVDV Screening для обнаружения генома вируса вирусной диареи крупного рогатого скота фирмы ThermoFisher

Актуальность. В настоящее время ВД КРС распространена практически во всех странах мира с интенсивным ведением животноводства. Особая актуальность проблемы заключается в большом экономическом ущербе, который складывается из снижения удоя во время болезни, гибели молодняка от серозной пневмонии, недополучения привесов живой массы у молодняка, потери продуктивности и воспроизводства животных и, как следствие, абортов и мертворождений, рождения нежизнеспособных телят, а также проведения профилактических, карантинных и ликвидационных мероприятий. Важным звеном в недопущении распространения вирусной диареи крупного рогатого скота остается оперативное проведение лабораторных исследований. Одним из самых технологичных методов диагностики является полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Методика. Оценку диагностической значимости тест-системы ОТ-ПЦР VetMAX BVDV Screening (Thermo Fisher) проводили по показателям чувствительности, специфичности и прецизионности в условиях повторяемости и воспроизводимости. Для определения повторяемости проводили исследование 5-ти образцов культуры клеток ПТ-80, зараженной эталонным штаммом «Орегон 24» и 7 образцов культуры клеток ПТ-80, зараженной изолятом «Ресса», в десятикратных разведениях от 10^–1 до 10^-7, одним оператором в трех параллельных исследованиях на одном оборудовании. Для определения воспроизводимости и чувствительности — тех же образцов тремя операторами в разные дни на одном оборудовании. Для определения специфичности проводили исследования 3 образцов, не содержащих вирус вирусной диареи — аденовирус КРС 1 типа, штамм Bovina — 10, вирус ринотрахеита КРС, штамм «Оренбург» и вирус парагриппа, 3 штамм ЗКСМ.

Результаты. После математической обработки результатов постановки ПЦР для оценки воспроизводимости получены следующие результаты: коэффициент вариации (СV) для тест-системы VetMAX BVDV Screening (Thermo Fisher) составлял 1,0–4,0%; коэффициент вариации (CV) при оценке повторяемости — 1–3%. Специфичность тест-систем VetMAX BVDV Screening (Thermo Fisher) составляла 100%. Тест-система VetMAX BVDV Screening (Thermo Fisher) чувствительна в отношении обнаружения генома вируса вирусной диареи КРС. Так, при постановке ПЦР проб изолята «Ресса» в разведении 10^–7 значения Сt определились на 38,18–39,24 циклах, эталонного вируса ВД «Орегон 24» в разведении 10^–5 — на 37,85–39,45 циклах амплификации.

1. Khodakaram-Tafti A., Farjanikish G.H., Persistent bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection in cattle herds. Iran. J Vet Res. Summer. 2017;18(3):154–163.

2. Simmonds P., Becher P., Collett M.S. et al. Family Flaviviridae. In: King A.M.Q., Adams M.J., Carstens E.B., Lefkowitz E.J. (Eds.). Virus Taxonomy: Ninth report of the International Committee on taxonomy of viruses. Elsevier Science. 2011;1003-1020.

3. Ridpath J.F. Bovine viral diarrhea virus. In: Mahy B.W.J., Regenmortel M.H.V. (Eds.). Encyclopedia of virology. Oxford (UK): Elsevier, 2008;374-380.

4. Schirrmeier H., Strebelow G., Depner K., Hoffmann B., Beer M. Genetic and antigenic characterization of an atypical Pestivirus isolate, a putative member of a novel Pestivirus species. J. Gen. Virol. 2004; 85:3647–3652.

5. Котенева С.В., Глотова Т.И., Глотов А.Г., Южаков А.Г. Генетический полиморфизм возбудителя вирусной диареи, выявленного у телят при вспышках респираторных болезней// Ветеринария. 2018;(4):25-31.

6. OIE Terrestrial Manual 2018; Chapter 3.4.7. Bovine viral diarrhoea; p.1075-1096.

7. Pellerin C, Vandenhurk J, Lecomte J, Tijssen P. Identification of a new group of bovine viral diarrhea virus stras associated with severe outbreaks and high mortalities. Virology. 1994. P.260–268.

8. Пчельников А.В. Этиология, возрастная и сезонная динамика вирусных респираторных болезней телят в племенных хозяйствах. 2017.

9. Шулыгин М.И. Выявление возбудителя вирусной диареи КРС с помощью полимеразной цепной реакции и генотипирование изолятов, циркулирующих на территории Российской Федерации. 2004.