Изоляция, идентификация и пробиотические свойства влагалищных изолятов молочнокислых бактерий здоровых сухостойных коров

Актуальность. Применение антибиотиков для лечения инфекций репродуктивных путей у коров может вызвать устойчивость бактерий к антибиотикам и ставит под угрозу здоровье человека. Потенциально препараты из представителей молочнокислой влагалищной микрофлоры (пробиотики) могут быть использованы качестве биологического контроля для сокращения использования антибиотиков в животноводстве. Однако видовой состав влагалищной молочнокислой микрофлоры здоровых сухостойных коров и ее пробиотические свойства остаются слабо документированы.

Методы. Проведена видовая идентификация каталазоотрицательных грамположительных изолятов бактерий, формирующих колонии на агаре MRS, выделенных из маточно-цервикальной слизи здоровых лактирующих коров в соответствии со стандартными процедурами с использованием культурально-зависимого подхода, биохимических тестов и тестов на ферментацию сахаров с помощью стрипов API50 CHL (bioMеrieux, Франция). Для тестирования на антагонистическую активность методом отсроченного антагонизма в отношении тест-культур стафилококков и эшерихий были отобраны 14 изолятов в соответствии с типированием отнесенные к 5 видам рода Lactobacillus.

Результаты. Полученные результаты свидетельствуют о том, что маточно-влагалищный биоценоз здоровых лактирующих коров представлен микроорганизмами семейства Lactobacillaceae, включая молочнокислые энтерококки и бактерии семейства Leuconostocaceae. В составе влагалищного биоценоза у коров без признаков патологии родовых путей обнаружено присутствие представителей родов Aerococcus, Peptostreptococcus и Gardnerella vaginalis. В соответствии с полученными результатами влагалищная популяция молочнокислых бактерий рода Lactobacillus обладает низкой или средней антагонистической активностью в отношении тест культур индикаторных штаммов стафилококков и эшерихий.

1. Thomas S. Döderlein’s Bacillus: Lactobacillus acidophilus. The Journal of Infectious Diseases. 1928;43:218-227.

2. Reid G, McGroarty JA, Tomeczek L, Bruce AW. Identification and plasmid profiles of Lactobacillus species from the vagina of 100 healthy women. FEMS Immunology and Medical Microbiology. 1996;15(1):23-26.

3. Pérez-Miravete A. Estudios sobre la flora vaginal. IX. Clasificación de Lac-tobacilli de origen vaginal. Rev Lat Microbiol Parasitol. 1967;9:11-14.

4. Исаева А.С., Летаров А.В., Ильина Е.Н. и др. Видовая идентификация влагалищных лактобацилл, выделенных у женщин репродуктивного возраста. Акушерство и гинекология. 2012;3:60-64.

5. Припутневич Т.В., Мелкумян А.Р., Анкирская А.С. и др. Использование современных лабораторных технологий в видовой идентификации лактобактерий при оценке состояния микробиоты влагалища у женщин репродуктивного возраста. Акушерство и гинекология. 2013;1: 76-80.

6. Демкин В. В. Видовое разнообразие лактобактерий вагинального микробиома: как посмотреть. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2018;36(3):3-12. https://doi.org/10.17116/molgen2018360313.

7. Fernandes, M.S.M.; Lourenço, M.L.M.C.; Vasconcelos, B.M.; Carneiro, V.A. Probiotics Lactobacillus strains: A promising alternative therapy against to biofilm-forming enteropathogenic bacteria? Biology 2019, 13, 544–551.

8. Zhao, J.; Wang, J.; Yang, Y.; Li, X.; Sun, C. In vitro assessment of probiotic properties of lactic acid bacteria isolated from vaginas of healthy cows. Indian J. Anim. Res. 2015, 49, 355–359. [CrossRef] y by Zhao et al. [154], we screened four different LAB strains (Leuconostoc lactis, Ilyobacter poly-tropus, E. hirae, and Weissella confusa) from the healthy cow’s vaginas

9. Styková E., Valocký I., rNovotný F., Guba P. Probiotic properties of vaginal lactic acid bacteria selected for harmonization of microenvironment of reproductive apparatus. 2012 J. of Microbiology, Biotechnology and Food Sciences 2(1):395-405

10. Redondo-López V, Cook RL, Sobel JD. Emerging role of lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora. Rev Infect Dis. 1990; 12: 856-872

11. Кузьмич Р.Г. Эндометриты у коров. – Витебск, 1999. – 110 с.

12. Лаптева, Л.И. Условно-патогенная микрофлора при острых послеродовых эндометритах у коров и их комплексная терапия: автореф. дис. … канд. вет. наук: 16.00.03 / Лаптева Людмила Ивановна. – Омск, 2004. – с. 10 – 11, 24.

13. Мирон, Н.И., Ощепкова М.Н. Лечение гнойно-катарального эндометрита у коров / Н.И. Мирон, М.Н. Ощепкова // Актуальные проблемы современной науки. Материалы трудов участников 8-й международной телеконференции. – 2012. – том 1, № 2. – с. 88. [Miron, N. I., Oshchepkova M. N. Treatment of purulent-catarrhal endometritis in cows / N. I. Miron, M. N. Oshchepkova // Actual problems of modern science. Materials of the proceedings of the participants of the 8th international television conference. - 2012. - volume 1, No. 2 – p. 88 (In Russ.)].

14. Турченко, А.Н. Применение широко используемых в животноводстве пробиотических препаратов для профилактики острых послеродовых эндометритов у коров (на молочных комплексах) [Электронный ресурс] / А.Н. Турченко, И.С. Коба, Е.Н. Новикова, М.Б. Решетка, А.И. Петенко, Е.Л. Гэрпинченко // Ветеринария Кубани. – 2012. – № 3. – Режим доступа: http://vetkuban.com/num3_20123.html

15. ОФС.1.7.1.0008.15 Пробиотики.

16. Tomás M. S. J., Claudia Otero M., Ocaña V.,and Nader-Macías M. E.Production of antimicrobial substances by lactic acid bacteria I. Article in Methods in Molecular Biology · February 2004 DOI: 10.1385/1-59259-766-1:337 · Source: PubMed

17. De Vos P., Garrity G.M., Jones D., Krieg N.R., Ludwig W., Rainey F.A., Schleifer K.-H., Whitman W.B. (eds), Bergey's Manual of Systematic Bacte-riology, 2nd ed., Volume The Firmicutes, Springer, New York, 2009, P. 465-511.

18. Felis G.E., Dellaglio F. Taxonomy of Lactobacilli and Bifidobacteria // Curr. Issues Intest. Microbiol. 2007. V. 8(2). P. 44-61.

19. Euzéby JP, Parte AC. "Lactobacillaceae". List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature (LPSN). Retrieved June 30,2021.

20. Aerococcus entry in LPSN [Euzéby, J.P. "List of Bacterial Names with Standing in Nomenclature: a folder available on the Internet". Int. J. Syst. Bacteriol. – 1997. – Vol. 47, N2. – P. 590–592.

21. Kremenchutsky G.N. Comparative evaluation of antagonistically reactive oxygen of physical and biological origin Sharun Text] / G.N. Kremenchutsky, L.G. Yurgel, A.V. // XII International Scientific Conference and discussion club "New information technologies in medicine and ecology": Crimea, Yalta Gurzuf., 2004. – P. 180.

22. Valchuk S.I. Biological properties of aerococci and bacilli - components of the new associative probiotic complex [Text] / S.I. Valchuk [et al.] // Visn.Dnipropetr.Univ.Ser.Biol.Med. – 2015. – Vol.6, N1. – P. 57-62.

23. Skerman VBD, McGowan V, Sneath PHA. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 1980; 30:225-420)

24. Gardner HL, Dukes CD. Haemophilus vaginalis vaginitis: a newly defined specific infection previously classified non-specific vaginitis. Am J Obstet Gynecol 1955; 69:962-976

25. Иркитова А.Н., Каган Я.Р., Соколова Г.Г. Сравнительный анализ методов определения антагонистической активности молочнокислых бактерий // Известия Алтайского государственного университета. – Серия Биологические науки. – 2012. – № 3 (1) [Irkitova A. N., Kagan Ya. R., Sokolova G. G. Comparative analysis of methods for determining the antagonistic activity of lactic acid bacteria // Proceedings of the Altai State University. - Biological Sciences series. – 2012. – № 3 (1) (In Russ.)].