Идентификация вариантов вируса вирусной диареи крупного рогатого скота — контаминантов производственных клеточных

Актуальность. Контаминация вирусом ВД КРС остается постоянной угрозой качеству биологических продуктов. Наиболее распространенным фактором контаминации являются эмбриональные бычьи сыворотки — основной фактор поддержки роста при культивировании клеточных линий, применение которых делает риск распространения вируса ВД КРС практически неизбежным.

Цель исследования — идентификация вариантов вируса вирусной диареи крупного рогатого скота — контаминантов производственных клеточных линий.

Методы. Использовались клеточные линии MDBK, BHK-21/13-02, PK-15, Vero и производственные штаммы вируса ВД КРС NADL, ВК-1. Для амплификации целевых участков вирусного генома применяли олигонуклеотидные праймеры, фланкирующие высококонсервативную нетранслируемую область 5`UTR длиной 289 п. н. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей, установленных методом секвенирования, проводился с применением стандартных методов молекулярной филогенетики.

Результаты. Факт хронической инфекции нецитопатогенным вирусом ВД КРС был подтвержден в отношении клеточных линий MDBK, BHK-21/13-02, PK-15. По результатам секвенирования контаминирующие варианты вируса были идентифицированы как представители субгенотипа 1a. Филогенетический анализ выявил их значительное сходство между собой и рядом штаммов, выделенных от персистентно инфицированных лам, альпак и косуль с идентичностью 96,8–99,2%. Представленные данные демонстрируют необходимость постоянного проведения подобных скринингов, что позволит повысить качество технологического сырья, используемого для производства биологических продуктов, а также усовершенствовать существующие средства серологической диагностики инфекций, вызываемых представителями рода Pestivirus.

1. Hou P., Xu Y., Wang H., He H. Detection of bovine viral diarrhea virus genotype 1 in aerosol by a real time RT-PCR assay. BMC Veterinary Research. 2020; 16: 114. https://doi.org/10.1186/s12917-020-02330-6

2. Wang Y., Pang F. Diagnosis of bovine viral diarrhea virus: an overview of currently available methods. Frontiers in Microbiology. 2024; 15: 1370050. https://doi.org/10.3389/fmicb.2024.1370050

3. de Oliveira P.S.B., Silva Júnior J.V.J., Weiblen R., Flores E.F. Subtyping bovine viral diarrhea virus (BVDV): Which viral gene to choose? Infection, Genetics and Evolution.2021; 92: 104891. https://doi.org/10.1016/j.meegid.2021.104891

4. Хафизова А.М. и др. Вирусная диарея — болезнь слизистых крупного рогатого скота: анализ эпизоотической ситуации и противоэпизоотических мероприятий. Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2024; 258: 214–221. https://www.elibrary.ru/dbwgnw

5. Abd El Fadeel M.R., Soliman E.M., Allam A.M., ElKersh M.F., Abd El-Baky R.M., Mustafa A. Efficacy and durability of bovine virus diarrhea (BVD) virus killed vaccine adjuvanted with monolaurin. PLoS. ONE. 2022; 17(7): e0269031. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0269031

6. Gómez-Romero N., Velazquez-Salinas L., Ridpath J.F., Verdugo-Rodríguez A., Basurto-Alcántara F.J. Detection and genotyping of bovine viral diarrhea virus found contaminating commercial veterinary vaccines, cell lines, and fetal bovine serum lots originating in Mexico. Archives of Virology. 2021; 166(7): 1999–2003. https://doi.org/10.1007/s00705-021-05089-9

7. Gauvin G., Nims R. Gamma-Irradiation of Serum for the Inactivation of Adventitious Contaminants. PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology. 2010; 64(5): 432–435.

8. Урываев Л.В. и др. О контаминации клеточных культур вирусом диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота (BVDV). Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2012; 153(1): 88–93. https://www.elibrary.ru/ooictr

9. Глотов А.Г., Глотова Т.И., Котенева С.В. О контаминации импортируемой фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота пестивирусами как факторе распространения вирусной диареи в условиях глобализации: мини-обзор. Сельскохозяйственная биология. 2018; 53(2): 248–257. https://doi.org/10.15389/agrobiology.2018.2.248rus

10. Алексеенкова C.В., Юров Г.К., Гальнбек Т.В., Калита И.А., Юров К.П. Проверка клеточных культур на контаминацию вирусом диареи крупного рогатого скота — необходимое условие производства биологических препаратов. Российский ветеринарный журнал Сельскохозяйственные животные. 2013; (1): 15–18. https://www.elibrary.ru/pyednf

11. Pastoret P.-P. Human and animal vaccine contaminations. Biologicals. 2010; 38(3): 332–334. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2010.02.015

12. Семенова О.В., Глотова Т.И., Глотов А.Г., Нефедченко А.В. Частота выявления посредством ОТ-ПЦР и выделения в культуре клеток вируса диареи крупного рогатого скота в Сибири. Российский ветеринарный журнал.2017; (1): 24–27. https://www.elibrary.ru/xxyqwb

13. Spetter M.J. et al. Detection methods and characterization of bovine viral diarrhea virus in aborted fetuses and neonatal calves over a 22-year period. Brazilian Journal of Microbiology. 2020; 51(4): 2077–2086. https://doi.org/10.1007/s42770-020-00296-z

14. Aguirre I.M., Fuentes R., Celedón M.O. Genotypic characterization of Chilean llama (Lama.glama) and alpaca (Vicugna.pacos) pestivirus isolates Veterinary Microbiology. 2014; 168(2–4): 312–317. https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2013.11.031

15. Harasawa R., Giangaspero M., Ibata G., Paton D.J. Giraffe Strain of Pestivirus: Its Taxonomic Status Based on the 5′-Untranslated Region. Microbiology and Immunology. 2000; 44(11): 915–921. https://doi.org/10.1111/j.1348-0421.2000.tb02583.x

16. Lamothe-Reyes Y., Figueroa M., Sánchez O. Host cell factors involved in classical swine fever virus entry. Veterinary Research. 2023; 54: 115. https://doi.org/10.1186/s13567-023-01238-x

17. Choe S. et al. Prevalence of Bovine Viral Diarrhea Virus Infections in Pigs on Jeju Island, South Korea, from 2009–2019 and Experimental Infection of Pigs with BVDV Strains Isolated from Cattle. Veterinary Sciences. 2022; 9(3): 146. https://doi.org/10.3390/vetsci9030146

18. Van Rijn P.A. A common neutralizing epitope on envelope glycoprotein E2 of different pestiviruses: Implications for improvement of vaccines and diagnostics for classical swine fever (CSF)? Veterinary Microbiology. 2007; 125(1–2): 150–156. https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2007.05.001

19. Schmitz-Dräger B.J. et al. Molecular Markers for Bladder Cancer Screening, Early Diagnosis, and Surveillance: The WHO/ICUD Consensus. Urologia Internationalis. 2015; 94(1): 1–24. https://doi.org/10.1159/000369357