Определение витамина B12 в сухих смесях для детского питания методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с хроматомасс-спектрометрическим детектированием

Актуальность. Витамин B12 (кобаламин) относится к группе водорастворимых витаминов. Данный витамин относится к классу тетрапирролов, биологически активных веществ, состоящих из пиррольных колец, связанных с ионами металлов. Так, в молекуле витамина B12 ядром является ион кобальта. Особенностью данного витамина является то, что его синтез в природе осуществляется только бактериями, в связи с чем он присутствует только в продуктах животного происхождения. И одним из источников его получения являются молоко и молочные продукты, в том числе обогащенные витаминами группы B. Низкие концентрации витамина B12, даже в обогащенных витаминными комплексами молочных продуктах, на уровне десятых и сотых долей миллиграмма, делают оценку его количественного содержания непростой аналитической задачей. Использование для этой цели обращено-фазовой жидкостной хроматографии с последующим детектирование посредством спектрофотометрического или диодно-матричного детектора связано с трудоемкой методикой пробоподготовки. В том числе и с многократным концентрированием пробы для достижения необходимых концентраций искомого вещества. В связи с чем разработка аналитического метода, позволяющего убрать описанные выше недостатки, является актуальной задачей.

Методы. В данной статье предлагается методика по оценке содержания витамина B12 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением масс-спектрометрического детектора (ВЭЖХ-МС). Разработанный в данном исследовании метод возможно использовать для лабораторного анализа витамина B12 в сухих смесях, предназначенных для детского питания, что обеспечит возможность более быстрого и эффективного получения результатов для целей контроля и мониторинга детского питания, обогащенного витаминными комплексами водорастворимых витаминов группы B.

Результаты. Представлен способ пробоподготовки, при котором коэффициент восстановления аналита в исследуемых образцах составил 99,12–99,31%. При оценке калибровочной кривой коэффициент корреляции составил r2 = 99,999. Рассчитанный предел обнаружения — 0,02 мкг/кг.

1. Авдей. Г.М. Неврологические проявления при дефиците витамина В12 / Авдей Г.М., Кулеш С.Д., Хоперский П.Г., Оганесян А.А // Медицинские новости.2020.- №4(307).- С. 47-51

2. Лунякова М.А. Витамин В12 - дефицитная анемия у детей грудного возраста: клиническая картина, современные методы диагностики и лечения / Лунякова М.А., Демихов В.Г., Дронова С.Н., Калинина Ю.Ю., Журина О.Н // Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2019.- Т.18.- №3.- С. 70-77 DOI: 10.24287/1726-1708-2019-18-3-70-77

3. H. Chassaigne, Ryszard Lobinski. Direct species-selective determination of cobalamins by ionspray mass spectrometry and ionspray tandem mass spectrometry. Analyst, Royal Society of Chemistry, 1998, 123 (1), pp.131--137. DOI: 10.1039/a704698g

4. Вдовиченко В.П. Факторы риска развития дефицита витамина В12 и его последствия / Вдовиченко В.П., Бронская Г.М., Борисено О.А., Коршак Т.А // Медицинские новости. 2019.- №8(299).- С. 13-18

5. Юрова Е.А. Контроль качества и безопасности продуктов функциональной направленности на молочной основе // Молочная промышленность.2020.-№6.- С. 12-15

6. Юрова Е.А. Разработка современных методов анализа для идентификации молока и молочной продукции // Молочная река.2020.- №2(74).- С.20-25

7. Campos-Giménez, E, Fontannaz P, Trisconi MJ, Kilinç T, Gimenez C, Andrieux P, 2008. Determination of vitamin B12 in food products by liquid chromatography/UV detection with immunoaffinity extraction: single-laboratory validation. J AOAC Int 91:786-93

8. H. Lichtenstein, A. Beloian, H. Reynolds J. Vitamin B12 in Foodstuffs, Comparative Vitamin B12 Assay of Foods of Animal Origin by Lactobacillus leichmannii and Ochromonas malhamensis Agric. Food Chem., 7 (1959), p. 771

9. B. Morelli, Fresen. J. Anal. Chem. 354 (1996) 97. Determination of a Quaternary Mixture of Vitamins B6, B1, and B12 and Uridine 5’-Triphosphate by Derivative Spectrophotometry DOI:10.1002/jps.2600840109

10. Kumar, S. S., Chouhan, R. S., & Thakur, M. S. (2010). Trends in analysis of vitamin B12. Analytical Biochemistry, 398(2), 139–149. https://doi.org/10.1016/j.ab.2009.06.041.

11. Hua-Bin Li, Feng Chen, Yue Jiang, 2000. Determination of vitamin B12 in multivitamin tablets and fermentation medium by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection Journal of Chromatography A 891(2):243-247 DOI:10.1016/S0021-9673(00)00724-X

12. Zironi E, Gazzotti T, Barbarossa A, Devicienti C, Scardilli M, Pagliuca G, 2013. Technical note: development and validation of a method using ultra performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry for determination of vitamin B-12 concentrations in milk and dairy products. J Dairy Res 96:2832-6.